Principi teorici cromatografia su colonna?

1. EFFICIENZA della SEPARAZIONE CROMATOGRAFICA.
2. TEORIA DEI PIATTI TEORICI.
3. H: altezza Equivalente di un Piatto Teorico (HEPT)
4. H= L/N= L/16 (W / t.

Come aumentare i piatti teorici?

Aumentando i piatti→i picchi sono più stretti→si hanno migliori separazioni. Il modo più semplice per aumentare il numero dei piatti consiste nell'aumentare la lunghezza della colonna ma ciò comporta un notevole aumento dei tempi di ritenzione. dove L è la lunghezza della colonna.

Come migliorare la risoluzione in cromatografia?

Per migliorare la risoluzione si può agire o sulla ritenzione K dei due analiti (variando le due k si varieranno anche i due tempi di eluizione), oppure migliorando l'efficienza della nostra cromatografia, ottenendo due picchi più stretti che, anche senza cambiare il loro tempo di eluizione, non siano più sovrapposti.

A cosa serve un HPLC?

L'HPLC è uno strumento di analisi rapido e di facile impiego che consente di indagare un ampio range di sostanze. L'obiettivo principale di una analisi cromatografica è: ottenere una separazione completa di una miscela in tempi relativamente brevi.

Cosa si può separare con la cromatografia?

La cromatografia è una tecnica di laboratorio per la separazione delle componenti di una miscela. Essa si effettua dissolvendo la miscela in un fluido detto “eluente”. Il fluido, trasportando le componenti lungo un supporto, permette loro di stratificarsi in diverse posizioni del supporto.

Su cosa si basa la tecnica della cromatografia *?

La cromatografia, nata quindi come tecnica di separazione e solo successivamente utilizzata anche come tecnica analitica, si basa sul fatto che i diversi componenti di una miscela tendono ad avere affinità diverse tra due fasi (la fase fissa è quella del supporto e la fase mobile è quella del solvente).

Cos'è la fase fissa?

La soluzione (fase fissa) viene fatta aderire ad un supporto solido e successivamente messa a contatto con un secondo solvente, immiscibile col primo (fase mobile). I componenti si ripartiscono fra il 1° solvente e il 2° secondo un rapporto caratteristico Kd.

Dove si applica la cromatografia?

La cromatografia per affinità si applica anche alle proteine: in questo caso è basata sulle interazioni fra la proteina che ci interessa separare e un'altra proteina, per esempio un anticorpo specifico, o un acido nucleico immobilizzato sulla matrice inerte.

Su quale principio si basa la cromatografia su strato sottile?

Cromatografia di adsorbimento

La cromatografia di strato sottile è basata per principio di cromatografia dell'adsorbimento. L'adsorbimento si riferisce ad un fenomeno dove una sostanza si accumula sulla superficie di un altro materiale, formante uno strato sottile.

Come scegliere l eluente?

Scelta dell'eluente. In TLC (cromatografia su strato sottile), cromatografia su colonna, HPLC, e altre tecniche cromatografiche, la scelta dell'eluente si basa sulla sua polarità: in base alla sua polarità l'eluente trascina con una "forza" diversa i componenti della miscela da separare.

A cosa serve l'equazione di Van Deemter?

L'equazione di van Deemter in cromatografia, chiamata in questo modo per Jan van Deemter, mette in relazione la varianza per unità di lunghezza di una colonna di separazione con la velocità della fase mobile lineare considerando le proprietà fisiche, cinetiche e termodinamiche di una separazione.

Come si calcola il tempo di ritenzione corretto?

Tempo di ritenzione corretto (t'R) = tempo impiegato da un componente della miscela privato del tempo impiegato dall'eluente [t'R = tR – tM].

A cosa servono le tecniche di separazione?

I metodi di separazione sono metodi chimico-fisici che permettono la separazione di una miscela nei singoli componenti che la formano. ... Quindi, in base al tipo di miscuglio può essere applicata una determinata tecnica che permette la separazione dei suoi componenti.

Cosa si intende per cromatografia?

cromatografia Metodo fisico di separazione che permette di frazionare una miscela nei suoi componenti sfruttando la differente distribuzione fra due diverse fasi messe a contatto. ... gassosa, in cui la fase mobile è gassosa e la fase stazionaria può essere solida ( c. gas-solido) o liquida ( c. gas-liquido); c.

A cosa serve l eluente?

del part. pres. eluens -entis del lat. eluere "lavare"] Di liquido o gas usato per l'eluizione di sostanze adsorbite su un mezzo adsorbente.

Come funziona la cromatografia liquida?

Si tratta di una tecnica cromatografica che permette di separare due o più composti presenti in un solvente sfruttando l'equilibrio di affinità tra una "fase stazionaria" posta all'interno della colonna cromatografica e una "fase mobile" che fluisce attraverso essa.

Su cosa si basa la cromatografia su carta?

La cromatografia su carta utilizza una forza capillare che sposta l'acqua (oppure un altro solvente) e il campione sulla striscia di carta. I composti più solubili del campione andranno più lontano, quelli meno solubili rimarranno sulla linea di partenza. Ciò provoca una loro separazione.

Come funziona un cromatogramma?

Un cromatogramma, in chimica, è il grafico prodotto da un'analisi cromatografica che correla la risposta del rivelatore del gascromatografo al tempo, ossia al volume di eluizione (se il flusso dell'eluente non è costante, il grafico del segnale rispetto al tempo non è uguale a quello che si ottiene riportandolo in ...

Che cosa è la fase stazionaria della cromatografia?

La fase stazionaria è un solido poroso o un gel con pori di dimensioni variabili in base alla composizione chimica e alla preparazione della matrice. Si parla di cromatografia di esclusione o gel filtrazione. La tecnica è impiegata per la separazione di molecole di grandi dimensioni (es miscela di proteine).

Come condizionare colonna HPLC?

Se la colonna viene sostituita mentre HPLC è in funzione, spegnere il sistema di pompaggio dal monitor (OFF) prima di svitare la colonna, e poi riattivare con ON una volta terminata l'installazione.