Produzione di proteine ricombinanti in cellule eucariotiche?

Come avviene il clonaggio genico?

Il processo del clonaggio richiede 4 fasi: isolamento di una sequenza di DNA, inserimento della sequenza in una cellula ospite, moltiplicazione delle cellule riceventi e selezione delle cellule.

Come inserire un gene estraneo in un plasmide?

A) Il gene che deve essere introdotto nel plasmide va innanzitutto isolato, per esempio a partire da cellule umane. B) Il plasmide deve essere estratto dai batteri. Entrambi devono poi essere tagliati in modo che il pezzo di DNA contente il gene d'interesse possa essere introdotto nel plasmide batterico.

Qual è la differenza tra la PCR è il clonaggio?

Questa procedura fu eseguita per la prima volta da Kary B. Mullis, che nel 1993 ricevette il premio Nobel. Le differenze fra questa tecnica e l'utilizzo dei plasmidi (vettori di clonazione) sono molte: la PCR è molto più rapida della clonazione ed è eseguita in vitro, ossia senza l'ausilio di nessun batterio.

Quali sono i vettori di clonaggio?

VETTORI DI CLONAGGIO

Sequenza di DNA capace di replicarsi in maniera autonoma che può essere utilizzata per trasferire frammenti di DNA esogeno. Quelli più utilizzati sono basati su DNA di plasmidi o sul DNA del batteriofago lambda.

Quali caratteristiche deve avere un vettore Plasmidico?

Plasmide ricombinante creato per sopperire alla laboriosa selezione necessaria per pBR322, si caratterizza per: avere lunghezza di circa 2686 bp in cui è possibile inserire un frammento di DNA esogeno di massimo 10kb; sequenza ori, origine della replicazione che funziona in E. Coli (la stessa presente in pBR322);

Quali sono le possibili applicazioni in medicina della tecnica del DNA ricombinante?

Le applicazioni possono essere utilizzate in diversi campi: Medico - sintesi di farmaci, vaccini e antitumorali (l'insulina umana è stata la prima molecola prodotta da un batterio ricombinante), fecondazione artificiale, diagnosi, terapie geniche.

Come si produce una proteina ricombinante?

Per ottenere proteine ricombinanti occorre clonare il gene che codifica per la proteina in particolari 'vettori di espressione' che contengano i segnali necessari per l'inizio della trascrizione e della traduzione. ... La scelta del sistema cellulare dipende dal tipo di proteina ricombinante che si vuole ottenere.

Come si chiama la tecnica di manipolazione del DNA?

Con il termine generico di ingegneria genetica (più propriamente tecnologia del DNA ricombinante) si fa riferimento ad una branca delle biotecnologie che consiste in un insieme molto eterogeneo di tecniche che permettono di isolare geni, clonarli, introdurli in un organismo esologo (differente dall'ospite originale).

Cosa sono i batteri ricombinanti?

In pratica isolare dei geni che ci interessano all'interno di un genoma (gene di interesse o esogeno), trasferirlo tramite un vettore di espressione in cellule o microrganismi diversi, farlo incorporare nel genoma della cellula ospite e clonarlo cioè amplificarlo in vivo.

Come posso essere le proteine?

Cosa sono i vettori di espressione?

Un vettore di espressione permette a un gene estraneo (transgene) di essere espresso in una cellula ospite. ... I vettori di espressione contengono queste sequenze addizionali, permettendo la sintesi di una proteina eucariotica da parte di una cellula procariotica.

Quali sono i vettori genici?

Nell'ambito della biologia molecolare ci si riferisce al termine vettore per indicare un sistema capace di trasportare sequenze di DNA di interesse all'interno di un organismo estraneo e permettere l'espressione dei geni o l'integrazione degli stessi nell'organismo target.

Che cosa sono i vettori Plasmidici?

Vettori plasmidici

I plasmidi sono elementi genetici di DNA, circolari ed extracromosomici, che si replicano in maniera autonoma rispetto al cromosoma batterico. ... In breve il clonaggio mediante vettore plasmidico consiste nel trattare sia il plasmide che il DNA da clonare mediante uno stesso enzima di restrizione.

Quali vettori si utilizzano per trasferire geni tra organismi diversi?

I virus attualmente studiati quali vettori per la terapia genica sono: i retrovirus; i lentivirus; gli adenovirus; i virus adenoassociati; gli herpes simplex virus. Ognuno di questi vettori presenta vantaggi e svantaggi.

A cosa serve una libreria genomica?

Una libreria genomica è un insieme di segmenti di DNA provenienti dal genoma di un individuo di una data specie. Ogni segmento è trasportato di solito da un plasmide o da un fago. Le librerie genomiche sono utilizzate per clonare un particolare gene contenuto nel genoma della specie da cui è stata ottenuta la libreria.

A cosa serve clonare il DNA?

Le applicazioni della clonazione genetica sono molteplici; la moltiplicazione di un frammento di DNA può avere scopo prettamente scientifico, e permette ad esempio lo studio delle caratteristiche biochimiche del gene stesso (composizione delle basi azotate, peso molecolare, localizzazione cromosomica e così via).

Cosa sono gli enzimi di restrizione ea cosa servono?

In sostanza gli enzimi di restrizione, che si trovano in molti procarioti dove hanno il ruolo di spezzare molecole di DNA estraneo, sono delle endonucleasi che catalizzano la scissione di entrambi i filamenti di DNA in corrispondenza di una specifica sequenza nucleotidica.

Come ottenere il gene di interesse?

Il gene d'interesse viene prima di tutto isolato dalla “fonte naturale”, ovvero dall'organismo che lo possiede: per fare ciò è possibile utilizzare la tecnica chiamata PCR (polymerase chain reaction) che permette di ottenere moltissime copie soltanto di questo gene, riuscendo a “ignorare” le regioni precedenti (a monte ...

Come ottenere molte copie di una sequenza di DNA?

Uno degli scopi della tecnologia del DNA ricombinante è la clonazione (cioè la produzione in molte copie) di un particolare gene allo scopo di poterlo analizzare o per poter ottenere grosse quantità del suo prodotto proteico.

Quali differenze esistono tra le tecniche del clonaggio e della clonazione?

Fra le tante metodologie che sono state messe a punto, negli ultimi tempi, ci sono la clonazione e il clonaggio del DNA. La clonazione può essere di due tipi: riproduttiva e terapeutica. ... Per clonaggio, invece, si intende la produzione di copie di pezzi di DNA.